AbClon
단백질, 펩타이드 제작 서비스
단백질 발현 정제 서비스
앱클론은 고객님의 연구에 중요한 재조합 단백질 및 항체를 편리하게 사용 할 수 있도록 단백질 발현 정제 서비스를 제공해 드립니다. 다양한 vector를 이용한 유전자 합성, 클로닝 서비스와 연계하여 단백질 발현 정제 서비스 진행이 가능합니다. Small scale에서 최적의 발현 및 정제 조건을 확인하고 대량 배양 및 정제 과정을 거쳐 효율적인 단백질 생산을 진행합니다. 연구목적에 따라 bacteria와 mammalian 시스템에서 단백질 발현 정제를 진행합니다.
Mammalian expression: HEK293F, ExpiCHO
Tag 정제: Fc or His Tag
Bacterial expression: BL21(DE3), BL21(DE3)pLysS, BL21(DE3) RIPL
Tag 정제: His or GST tag
시스템 별 Flow
Mammalian expression
-
- 30ml x 2 Condition Transfection & culture
-
- · 발현 양상 테스트
- · 2~3주
-
- 30ml x 2 Culture sup.
Purification -
- · 정제효율 테스트
- · Fc or His Tag
- · 1~2주
-
- 1L transfection &
culture & Puri. -
- · scale up(1~10L)
- · Fc Tag or His Tag
- · 5~7주
-
- Quality control
-
- · SDS-PAGE 확인
- · 1주
-
- Delivery or
Next process -
- · 완료
- · 보고서
Bacterial expression
-
- Small culture for
expression test -
- · 발현 양상 및 정제
테스트 - · 1~2주
- · 발현 양상 및 정제
-
- 2L culture
-
- · Scale up(2~50L)
- · 1~2주
-
- Purification
-
- · His or GST Tag
- · 1~2주
-
- Quality control
-
- · SDS-PAGE 확인
- · 1주
-
- Delivery or
Next process -
- · 완료
- · 보고서
특장점
- · Native 단백질과 유사한 형태의 단백질 및 항체 생산 : Mammalian expression
- · 저렴한 비용으로 신속하게 단백질 생산 : Bacterial expression
고객 준비사항
클로닝된 vector
Vector 정보
클로닝 정보
Signal 펩타이드 & Kozak 서열 정보 (Mammalian expression)
Tag 정보
Isotype 정보 (항체 생산)
펩타이드 합성 서비스
고품질의 펩타이드를 다양한 순도(~98%), 양(mg ~ kg), 길이(~150mer)로 고객이 원하는 형태로
합성할 수 있으며 펩타이드 Modification 합성도 가능합니다. 또한 항원 제작을 목적으로
하는 경우 앱클론만의 다양한 항체제작 노하우를 바탕으로한 펩타이드 서열분석 및 예측 서비스를
무료로 제공해드립니다.
합성할 수 있으며 펩타이드 Modification 합성도 가능합니다. 또한 항원 제작을 목적으로
하는 경우 앱클론만의 다양한 항체제작 노하우를 바탕으로한 펩타이드 서열분석 및 예측 서비스를
무료로 제공해드립니다.
서비스 범위
- 펩타이드 서열분석 및 예측
- 단순 합성부터 복잡한 Modification 합성
- 선형부터 원형 합성
- 대량 합성
- 다양한 순도 (>70%, >75%, >80%, >85%, >90%, >95%, >98%)
- 다양한 Modification (Biotinylation, Phosphorylation, Acetylation, Methylation, Dye labeling 등)
- 펩타이드 라이브러리 제작
서비스 Flow
-
- Synthesis
-
- · Solid-Phase Peptide Synthesis
-
- Purification & Quality Control
-
- · MS
- · HPLC
-
- Quality Assurance
-
- · MS
- · HPLC
-
- Delivery or Next process
-
- · 완료
List of Modification
| N,C-Terminal Modification |
Special Amino acid | Fluorescence/ Dye labeling |
Cyclic Peptide |
Quenched Fluorescent Peptide |
Multiple Antigenic Peptide System |
Protein Conjugation |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Acetylation (N-Terminal) |
D-Arg, D-Cys, DAsp, D-Asn, D-Glu, D-Gln, D-Ser, D-His, D-Thr, D-Trp, D-Ala, D-Leu, D-Ile, D-Met, D-Pro, D-Val, DPhe, pGlu | Biotin (NTerminal) | Disulfide bridge 1st |
Abz/Tyr (3-NO 2) | Asymmetric 4 branches |
KLH |
| HYNIC (N-Terminal) |
Hyp, D-Lys,D-Tyr, D-Orn, Orn, Abu, Aib, (D)1-Nal, (D)2- Pal, (D)-4-Cl-Phe, Nva, Nle, Hse, Hcy, Pen, Mpa | Biotin (Lys in sequence) |
Disulfide bridge 2nd |
EDANS/DABCYL | Asymmetric 8 branches |
BSA |
| DTPA (N-Terminal) |
N-Methyl amino acid (Ala, Phe, Leu, Ile, Val, Gly, Met) | Biotin (without Lys in sequence) |
Disulfide bridge 3rd |
|||
| Formylation (N-Terminal) |
Other amino acid Dinitrobenzoylation (Lys) | FITC/5-FAM (N-Terminal) |
Amide cyclic (Side chain, Terminal) |
|||
| Fatty acid (N-Terminal) |
Lys(Me 2) | Dansyl(NTerminal) | ||||
| Myristic acid (N-Terminal) |
Phosphorylation (Tyr, Ser, Thr, single site) |
MCA (NTerminal) | ||||
| Palmytolyl (N-Terminal) |
Tyr(SO3H2) | p-Nitroanilide (Pna, CTerminal) |
||||
| Benzyloxycarbonylati on (CBZ) |
Ser(octanoic acid) | AMC (C-Terminal) |
||||
| Amidation (C-Terminal) |
||||||
| Succinylation (Suc, N-Terminal) |
Conjugation 서비스
Small molecule, peptide, chemical 등을 항원으로 사용할 경우 면역원성을 증가시키기 위해 carrier 단백질에 conjugation 하여 항체 제작 효율을 높여줍니다.
Carrier 단백질 종류 : KLH, BSA
Conjugation Linker
- Sulfo-SMCC: -SH기 (thiol group) 를 활용하여 conjugation
- - 펩타이드의 경우 cysteine을 이용하며 인위적으로 추가도 가능
- · CysXXXXXXXXXX 또는 XXXXXXXXXXCys (O)
- · XXXXXCysXXXXX (X)
- - Carrier 단백질에 있는 lysine의 NH2기와 결합
- - 펩타이드의 경우 cysteine을 이용하며 인위적으로 추가도 가능
Sulfo-SMCC conjugation
- Glutaraldehyde: -NH2(free amino group, N-terminal)기를 활용하여 conjugation
- - 펩타이드의 경우 lysine이 없어야 함
- · XXXXXLysXXXXX (X)
- - Carrier 단백질에 있는 Lysine의 NH2기와 결합
- - 펩타이드의 경우 lysine이 없어야 함
Glutaraldehyde conjugation
- EDC: -COOH기 (carboxyl group, C-terminal) 를 활용하여 conjugation
- - 펩타이드의 경우 aspartic acid와 glutamic acid가 없어야 함
- · XXXXXAspXXXXX 또는 XXXXXGluXXXXX (X)
- - Carrier 단백질에 있는 aspartic acid와 glutamic acid의 COOH기와 결합
- - 펩타이드의 경우 aspartic acid와 glutamic acid가 없어야 함
EDC conjugation
Small molecule (펩타이드 포함) 을 carrier 단백질과 conjugation하여 항체를 제작할 경우 특이적인 항체 생성을 확인하기 위하여 면역에 사용한 carrier 단백질과 다른 종류의 carrier 단백질을 conjugation 하여 ELISA 스크리닝에 사용합니다.
- 예) 면역 → KLH conjugated 펩타이드
- 예) ELISA 스크리닝 → BSA conjugated 펩타이드
