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항체공학서비스

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Antibody Sequencing

항체 유전자 서열 정보의 확인은 단클론 항체(mAb)의 humanization, affinity maturation등의 antibody engineering, function optimization, 데이터베이스 뱅킹 및 특허 출원을 위한 필수적인 과정입니다. Hybridoma 개발 후 세포주 관리가 어려우신 경우에도 강력하게 추천드릴 수 있는 서비스입니다. Hybridoma는 비특이적 항체를 암호화하는 가성유전자(pseudogenes) 및 mRNA를 포함할 수 있고, 이는 표적항체를 클로닝하기 위한 primer에 의해 증폭될 수 있으므로 앱클론에서는 항체에 대해 독립적인 3~5 개의 클론을 sequencing하고 Fab 형채로 생산하여 ELISA로 항원과 반응시켜 정확성을 보장합니다.

특장점

  • Fab construction하여 항원과 반응하는 variable region 서열 확인
  • 소요기간: 약 8~10주
  • mAb 서열 분석의 풍부한 경험

고객준비사항

  • Hybridoma cell (>1×106 cells)
  • 항원 (50ug)

앱클론 제공

  • Variable region 서열
  • Variable region DNA (H-L chain)

PCR 과정

  • Overlap extension PCR

ELISA 확인 후 서열 확인

  • PCR을 통해 만들어진 Fab으로 항원과의 반응 확인 후 서열 확인

Antibody humanization

Mouse Monoclonal Antibody의 친화도나 활성을 유지하면서 mouse 항체의 유전자를 90% 이상 humanization 해드립니다. 앱클론의 항체개발 노하우가 집약되어 있는 CDR grafting 플랫폼 기술은 정확하고 신뢰도가 높습니다.

특장점

  • 신뢰도 높은 CDR grafting 플랫폼
  • 소요기간: 약 3개월
  • 다양한 치료용 항체 개발 경험

고객준비사항

  • Variable region 서열
  • 항원 (50ug)
  • IgG backbone (option)

앱클론 제공

  • Humanized 서열
  • Variable region Humanized DNA (H-L chain)
  • Affinity 분석 결과 (KD)
  • Full IgG(100ug)

서비스 Flow

  • 서열 분석
    • · Variable region 분석
  • Frame work 디자인
    • · Frame work 비교
  • CDR grafting
    • · hzAb 디자인
  • Humanized
    항체 생산
    • · codon optimization
    • · mammalian
      expression
  • Binding affinity 측정
    • · octet

Affinity maturation

생체 내에서 자연적으로 발생하는 affinity maturation은 somatic hypermutation과 clonal selection에 의해 일어나는데 이 원리와 항체 라이브러리 스크리닝 기술을 이용하여 in vitro 상에서 affinity를 증가시켜 드립니다. Variable region에 다양성을 부여한 라이브러리로부터 biopanning을 통해 Affinity를 개선해 드립니다. Original 항체의 Affinity를 측정한 뒤 항체의 Affinity 증진을 목적으로 CDR region에 대한 randomization을 진행하여 항체 라이브러리를 개발하고 biopanning 과정을 통해 Affinity가 개선된 항체를 선별합니다. Affinity maturation을 위해 개발된 항체 라이브러리의 다양성은 약 109이며 Octet을 이용해 affinity를 분석합니다.

고객준비사항

  • Variable region 서열
  • 항원 (1mg)
  • 항체 (control로 사용)
  • IgG backbone (option)

앱클론 제공 (TOP 5 clones)

  • Affinity matured 서열
  • Affinity matured variable region DNA (H-L chain)
  • Affinity 측정 결과
  • scFv (100ug)

서비스 Flow

라이브러리 구축
  • Reaction confirmation
    • · Library 디자인 결정
    • · Bio-panning 전략 결정
    • · 항체 Affinity 확인
    • · 항원 항체 확인
      (BCA, SDS PAGE)
    • · 항원 항체 반응 확인
      (Periplasmic extract)
  • Library Construction
    • · Analysis of CDR
    • · CDR randomization
    • · Library QC
  • Affinity Selection
    • · Bio-panning
    • · Output clone의 ELISA, Sequence analysis
    • · TOP 5 선정
  • Full IgG 생산 및 affinity 확인
    • · TOP 5 Full IgG 생산
    • · Affinity 확인

문의사항

02-2109-1282