AbClon
항체제작서비스
Mouse Monoclonal Antibody
Mouse Monoclonal Antibody(단클론항체)는 하나의 B cell에서 유래된 항체로 하나의 epitope만 인식하여 특이성이 높기 때문에 연구용뿐만 아니라 진단이나 치료용으로도 널리 사용됩니다. 항원으로는 주로 펩타이드 혹은 정제된 단백질이 사용되고 chemical이나 세포 등 다양한 물질로도 항체 제작이 가능합니다. Polyclonal antibody에 비해 항체 개발 기간이 길고 과정이 복잡하지만 개발된 항체는 동일한 품질로 지속적인 생산이 가능한 장점을 가지고 있습니다. 일반적인 Mouse Monoclonal Antibody(단클론항체) 제작(SOP)은 항원을 주사 후 비장세포를 적출하여 mouse myeloma (골수종 세포)와 세포융합을 해서 항체를 생산하는 hybridoma (Mouse Monoclonal Antibody (단클론항체)를 생산하는 세포)를 제작하는 것입니다. 앱클론에서 독자적으로 개발한 MANI (Monoclonal Antibody Next Innovation) 프로토콜은 SOP에 비해 항원에 반응하는 positive 클론의 수가 획기적으로 증가되는 방법입니다. Activity가 확인된 monoclonal antibody(단클론항체)의 대량생산을 위해 in vivo 복수/정제 혹은 in vitro 배양/정제 서비스도 제공하고 있습니다. 항체 제작 성공률을 높이기 위한 항원의 형태는 native 단백질에 가까운 형태로 크기는 20 kDa 이상을 추천합니다. 따라서 native 단백질 > recombinant 단백질 >펩타이드 순으로 항체 제작 성공률이 높은 경향을 보입니다. 단백질 크기가 작은 경우 tag 단백질을 붙여 크기를 증가시켜 면역을 하고 tag 단백질에 대한 negative selection 으로 항원 특이적인 항체를 선별할 수 있습니다.
서비스 상세 내용
| 품목 | 개체수 | 제공 클론 | 제공물 |
|---|---|---|---|
| SOP | 마우스 4마리 | ~ 5클론 | Final serum (~500 ul / 마리) Final cell culture sup. (~10 ml / 클론) Final stock (5 vials / 클론) |
| MANI 프로토콜 | ~ 10클론 |
※ 항원에 대한 ELISA 게런티(미충족시 해당 단계 비용의 절반 청구)
※ 게런티: SOP fusion 및 cloning은 2클론, MANI fusion 및 cloning은 5클론
※ 게런티: SOP fusion 및 cloning은 2클론, MANI fusion 및 cloning은 5클론
특장점
- MANI 프로토콜은 SOP보다 많은 수의 클론 확보 가능
- MANI 프로토콜은 SOP에 비해 개발기간이 짧음
- Fusion screening 후 culture sup. 제공 (WB, IP, FACS 등으로 항체 activity 확인 가능)
- 원하는 클론을 선별하여 cell 클로닝 가능
- 실험 진행 단계별 data 발송 및 1:1 맞춤 상담 서비스
- 동일한 품질로 지속적인 항체 생산 가능
- 한가지 epitope에 반응하는 항체로 특이성이 높음
고객준비사항
- 항원 단백질 보유
- - 필요량: 2.5 ~ 3mg
- - 농도: 1.0mg/ml 이상
- - 순도: 95% 이상(SDS-PAGE 기준)
- - 권장 사이즈: 20kDa 이상
- 펩타이드 서열 보유
- - 펩타이드 합성 및 conjugation 서비스 연계 가능
- * 서열 분석 및 예측 서비스 가능
- * 권장 길이: 10 ~ 20 mer
- * 필요량: 5mg
연계 서비스
- 항체 생산 정제 서비스
- - In vitro 생산: Hybridoma 배양을 통해 항체 생산
- - In vivo 생산: 마우스 복강에서 복수형태로 항체 생산
- - IgG 정제: Protein A, G를 이용하여 복수 혹은 배양액 내 전체 IgG 정제
- - Affinity 정제: 항원과 결합하는 특정 IgG만 정제
- Epitope mapping
- - 항체, 배양액을 이용하여 epitope 확인
- 항체 conjugation
- - Biotin
- - HRP (horseradich peroxidase)
- - FITC
- - PE (phycoerythrin)
서비스 Flow
Humanized Mouse Monoclonal Antibody
ADA와 마찬가지로 mouse유래 치료용 항체를 제작 후 사용에 있어 이에 대한 면역반응이 발생한다면, 아무리 뛰어난 효과가 있는 치료제라 하더라도 안정성을 검증 받기 어려울 수 있습니다. AbClon에서는 Antibody Humanized mice 생산 platform의 특허 기술을 가진 Biocytogen과 협력하여 강력한 임상 개발 전문성을 결합해 약물 개발 프로세스 전반을 간소화 하였습니다. 기존 mouse 유래 antibody에서 humanization을 진행 후 affinity maturation까지 진행해야 하는 번거로움과 소모되는 기간, 생산된 항체의 성능까지 향상시키는 혁신을 한 번에 이루었습니다. 또한, 연구의 처음 단계부터 Antibody Humanized mouse를 이용해 항체를 제작하기 때문에 치료용으로써의 안정성을 확보한 채 연구가 진행되는 이점이 있습니다.
Antibody Humanized mouse를 통해 생산된 monoclonal antibody는 기존의 일반 mouse로 제작한 antibody와 동일하거나 더 나은 성능을 제공하며, 이미 Humanization이 된 상태로 antibody가 생성되므로 monoclonal antibody 제작 후 정제 과정만 거치면 추가 작업 없이 효율 좋은 항체를 바로 사용 가능합니다.
Antibody Humanized mouse를 통해 생산된 monoclonal antibody는 기존의 일반 mouse로 제작한 antibody와 동일하거나 더 나은 성능을 제공하며, 이미 Humanization이 된 상태로 antibody가 생성되므로 monoclonal antibody 제작 후 정제 과정만 거치면 추가 작업 없이 효율 좋은 항체를 바로 사용 가능합니다.
Rabbit Monoclonal Antibody
Rabbit mAb는 Mouse mAb와 비교하여, 높은 affinity와 specificty를 갖는다고 알려져 있습니다. Mouse mAb는 ~ -1010M의 binding affinity를 갖는 반면, Rabbit mAb는 ~ -1012M의 binding affinity를 갖고있어 mouse 대비 10~100배 높은 affinity를 나타냅니다. 뿐만아니라, 높은 specifity의 Rabbit mAb는 작은 펩타이드, PTM(Post-translational modification), homology가 높은 항원을 구별할 수 있어서 치료용 항체제작 및 IHC와 같은 진단용 항체 제작 등에 널리 활용될 수 있습니다. 앱클론에서는 기존의 hybridoma 방식이 아닌, 면역후 정제하여 얻은 Rabbit antibodies를 분석하여 약 20개의 mAb의 서열을 한번에 확인 가능합니다. 확보된 서열을 바탕으로 재조합 항체를 제공하여 추가 검증실험에 활용할 수 있습니다.
특장점
특장점
- 99.9% coverage의 MS sequencing 분석
- NGS 분석결과를 토대로 서열 정확도 확보
- 항체 서열(full sequence) 한번에 대량 확보(5~20개)
- 주요항체 최대 3~5개 제공
- 다양성이 높은 Rabbit monoclonal antibody 확보
- 항원 항체 반응성 확인 (ELISA)
서비스 Flow
고객준비사항
- 단백질 보유
- - 단백질 필요량: 12 mg이상 (Affinity 정제용 포함)
- - 농도: 1.0mg/ml 이상
- - 순도: 95% 이상(SDS-PAGE 기준)
- - 권장 사이즈: 20kDa 이상
- 서열 보유시
- - 펩타이드 합성 또는 단백질 발현 서비스 연계 가능
앱클론 제공
- 5~20 Monoclonal Antibody Sequence
- 최대 3~5개 Monoclonal Recombinant Antibody 제공
- 항원 항체 반응 ELISA 데이터 제공
- (option) 확보된 항체 서열을 모두 재조합항체 생산 가능
- (option) 대용량 재조합 항체 생산 가능
Polyclonal Antibody
Polyclonal antibody (다클론항체) 는 다양한 epitope를 인식하는 항체로 단기간에 저렴한 비용으로 제작할 수 있으며 WB, IHC, ICC, ELISA 등 다양한 연구분야에 폭넓게 활용하고 있습니다. 항원으로는 주로 펩타이드나 정제된 단백질이 사용되고 chemical이나 세포 등 다양한 물질로도 항체 제작이 가능합니다. 항체는 serum 형태로 제공되며 항체 activity 확인 후 필요 시 정제를 진행하여 품질을 향상시킬 수 있습니다.
Host 종류 및 제공 Serum양
| Host | Pre-immune serum | Test serum | Final serum |
|---|---|---|---|
| Rabbit 2마리 | ~ 500 ul | ~ 500 ul | ~ 40 ml |
| Mouse 4마리 | ~ 500 ul |
※ 개체당 제공하는 serum 양은 동물의 상태에 따라 변동 될 수 있습니다.
특장점
- Test serum을 제공하여 면역 단계별 항체 activity 확인 가능
- 실험 진행 단계별 data 발송 및 1:1 맞춤 상담 서비스
- 고품질의 동물을 사용하여 pre-immune serum의 background가 낮음
- 여러 epitope를 인식하는 항체로 다양한 실험에 활용 가능
- 저렴한 비용으로 단기간 내 제작 가능
고객준비사항
- 항원 단백질 보유
- - 필요량: 2.5 ~ 3mg
- - 농도: 1.0mg/ml 이상
- - 순도: 95% 이상(SDS-PAGE 기준)
- - 권장 사이즈: 20kDa 이상
- 항원 단백질 서열 보유
- - 유전자 합성 서비스와 단백질 발현 정제 서비스 연계 가능
- 펩타이드 서열 보유 혹은 단백질 서열 보유
- - 유전자 합성 서비스와 단백질 발현 정제 서비스 연계 가능
- - 펩타이드 합성 및 conjugation 서비스 연계 가능
- * 서열 분석 및 예측 서비스 가능
- * 권장 사이즈: 12~20 mer
- * 필요량: 5mg
앱클론 제공물
- Pre-immune serum
- Test serum
- Final serum
- ELISA data
연계 서비스
- 항체 정제 서비스
- - IgG 정제: Protein A, G를 이용하여 serum 내 전체 IgG 정제
- - Affinity 정제: 항원과 결합하는 특정 IgG만 정제
- Epitope mapping
- - 항체, 배양액을 이용하여 epitope 확인
- 항체 conjugation
- - Biotin
- - HRP (Horseradish peroxidase)
- - FITC
- - PE (Phycoerythrin)
서비스 Flow
항체 라이브러리
Rz 라이브러리는 앱클론에서 자체 개발한 human synthetic 라이브러리로 Fab과 scFv 형태의 2종을 보유하고 있습니다. 다양한 종류의 항원과 결합하는 Fab 또는 scFv 형태의 항체 제공이 가능하며 단시간 내 (6주) 에 원하는 항체를 선별할 수 있습니다. Trinucleotide mutagenesis를 이용한 라이브러리로 stop codon 발생을 억제하여 항체 개발 성공률을 극대화 하였으며 다양한 종류의 항체 개발 성공 경험이 있는 검증된 라이브러리입니다. 또한, 1*1010 이상의 다양성을 가지고 있는 라이브러리입니다. 하이브리도마를 이용한 항체 개발 보다 적은 양의 항원으로 단기간 내에 항체를 개발할 수 있습니다.
Library 형태
특장점
- Human antibody library
- Stable antibody scaffold
- High functionality (trinucleotide mutagenesis)
- High diversity of CDRs (> 1*1010)
- Outstanding success in drug discovery
고객준비사항
- 항원 단백질 보유
- - 필요량 : 100ug
- - 순도 : 95% 이상(SDS-PAGE 기준)
- 항원 단백질 서열 보유
- - 유전자 합성 서비스와 단백질 발현 정제 서비스 연계 가능
앱클론 제공물
- Fab or scFv 제공 (100ug) (최대 5개 (항원 ELISA 기준))
- ELISA Test REPORT
- Variable region 서열정보
- Variable region Fragment
Library 사례
- 현재 Rz Library를 통해 자체 개발 중인 항체
| Disease Field | Target (Target size) |
|---|---|
| Oncology | A (180 kDa) |
| B (175 kDa) | |
| C (200 kDa) | |
| D (60 kDa) | |
| Autoimmune | E (80 kDa) |
| F (17 kDa) | |
| G (22 kDa) | |
| H (50 kDa) |
연계 서비스
- Antibody Engineering
- - Full IgG conversion
- Epitope mapping
- - Fab 혹은 scFv를 이용하여 epitope 확인
- Efficacy test
- - In vitro
- - In vivo
서비스 Flow
